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在 ELISA 实验所需的简单仪器中，摇床是个迷惑的存在，科研猿们经常在是否需要使用中举棋不定。大多数的 ELISA 实验是不需要使用摇床的，室温孵育即可，但有些特殊的 ELISA 不但需要摇床，且有严格的使用参数。

在 R&D Systems® ELISA 试剂盒说明书中，其实早有答案，以 Human IL-6 Quantikine HS ELISA Kit（货号 HS600C）为例，操作流程（Assay procedure）部分中提到：

这里，建议使用 500 rpm，0.12" orbit 参数的摇床/振荡器。

• 摇床长什么样？为什么需要使用摇床？

众所周知，实验室里通常有各种用途及规格的摇床，如用来培养细菌、动物细胞及用于 Western Blot 抗体孵育的摇床等。

我们 ELISA 说明书中要求的摇床类似下图，该摇床专为 96 孔板设计，轨道直径 3 mm，转速可达到 500±50 rpm，运行时快速振动，且顶部托盘有微孔板固定装置，微孔板既不会松脱，也不会有液体飞溅。

如果在 ELISA 产品说明书中要求使用摇床，则必须使用，否则会影响抗原抗体的有效结合，导致待测孔的 OD 值偏低。

例如使用 Human/Mouse/Rat Activin A Quantikine ELISA Kit（货号 DAC00B），在未使用摇床时得到的标准品 OD 值（450 nm 的测定值减去 570 nm 的测定值）异常（表 1）。

结果显示，最高浓度（1,000 pg/mL）的标准品平均 OD 值仅为 0.647，且 125pg/mL 标准品两个复孔 OD 值相差较大，低浓度标准品 OD 值无明显梯度。因而无法保证检测结果的准确性。而在使用了摇床的实验中，标准品 OD 值正常（表 2）。

• 是否必须使用指定参数的摇床？可以用其它规格代替吗？

由于说明书中指定的轨道直径 3 mm，转速 500±50 rpm 的摇床是我们验证过的能保证准确结果的摇床，而其它摇床，如 Western Blot 实验中使用的水平摇床轨道直径较大，如果设置成 500rpm 就会转速太快，容易造成微孔板内液体飞溅、样品孔污染，进而影响实验结果的准确性。

如果您希望使用其它规格的摇床尝试，可进行如下操作：

将适量体积的液体加入备用 96 孔微孔板，用封口膜覆盖孔板；

调整摇床速度，让液体剧烈振荡，使其几乎旋转到微孔板的顶部，但不能形成气泡或飞溅到封板膜上；

使用 R&D Systems® 的试剂盒做一次标准曲线，验证一下实验结果是否可以接受。

但这种测试需要耗费额外的孔板及时间，得不偿失，所以最好还是根据说明书的建议选择摇床。

小小的摇床，却关乎实验的成败。当我们准备开展实验时，不妨多研读一番说明书，不要错过其中的细枝末节。

以上文字和图片来源于Bio-techne